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神經(jīng)母細(xì)胞瘤條件重編程培養(yǎng)基

簡要描述:原代神經(jīng)母細(xì)胞瘤條件重編程培養(yǎng)基(Human Neuroblastoma Conditional Reprogramming Medium)是一種為促進(jìn)人源神經(jīng)母細(xì)胞瘤原代細(xì)胞體外生長而開發(fā)的培養(yǎng)基。

  • 產(chǎn)品型號(hào):型號(hào)齊全
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時(shí)間:2023-07-08
  • 訪  問  量:960
詳情介紹

產(chǎn)品名稱原代神經(jīng)母細(xì)胞瘤條件重編程培養(yǎng)基(Human Neuroblastoma Conditional Reprogramming Medium)
產(chǎn)品說明原代神經(jīng)母細(xì)胞瘤條件重編程培養(yǎng)基Human Neuroblastoma Conditional Reprogramming Medium)是一種為促進(jìn)人源神經(jīng)母細(xì)胞瘤原代細(xì)胞體外生長而開發(fā)的培養(yǎng)基。它是一種無菌的液體混合系統(tǒng),含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機(jī)和無機(jī)化合物、激素、生長因子、微量礦物質(zhì)等。該培養(yǎng)基產(chǎn)品基于碳酸氫鹽的緩沖體系,在5%CO2、37℃培養(yǎng)箱中平衡時(shí),pH值為7.4。該培養(yǎng)基的配方可以提供一個(gè)理想人源神經(jīng)母細(xì)胞瘤原代細(xì)胞體外培養(yǎng)環(huán)境,選擇性地促進(jìn)體外人源神經(jīng)母細(xì)胞瘤原代細(xì)胞的生長。實(shí)現(xiàn)了體外培養(yǎng)周期短、成本可控、操作便捷的目的,提高了腫瘤組織原代細(xì)胞培養(yǎng)成功率。

產(chǎn)品優(yōu)勢
(1) 培養(yǎng)成功率高

(2) 體外持續(xù)擴(kuò)增

(3) 保持腫瘤原始病理特征

(4) 藥敏結(jié)果宇臨床數(shù)據(jù)接近

使用說明
?使用前準(zhǔn)備
(1) y射線照射過的NIH-3T3細(xì)胞(40Gy輻照)。
(2)15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺(tái)中紫外照射30min。提前30min從4℃冰箱取出原代細(xì)胞培養(yǎng)基平衡至室溫。

?神經(jīng)母細(xì)胞瘤原代細(xì)胞培養(yǎng)
1)獲取的人源神經(jīng)母細(xì)胞瘤原代細(xì)胞,按照表1中細(xì)胞數(shù)接種在合適的培養(yǎng)器皿中,加入y射線輻照后的NIH-3T3細(xì)胞(添加滋養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量如表1和表2所示)。
2)原代細(xì)胞初次接種后2~3天勿動(dòng)(利于細(xì)胞貼壁),培養(yǎng)過程中若培養(yǎng)基顏色變黃但細(xì)胞未長滿時(shí)可進(jìn)行半換液。
3)鏡下觀察細(xì)胞未長滿但3T3細(xì)胞已不足時(shí),適量補(bǔ)充γ 射線輻照后的3T3細(xì)胞(一般補(bǔ)加初始數(shù)目的一半)。

∶針對(duì)實(shí)體瘤樣本,細(xì)胞粒徑大于12微米進(jìn)行計(jì)數(shù);倍增時(shí)間>48小時(shí)則定義為增殖較慢的細(xì)胞;對(duì)于增殖較快細(xì)胞,可以綜合倍增時(shí)間、接種器皿的規(guī)格以及培養(yǎng)周期來估算接種的細(xì)胞數(shù)量;表格供參考,具體實(shí)驗(yàn)具體對(duì)待。
?神經(jīng)母細(xì)胞瘤原代細(xì)胞傳代
1)鏡下觀察細(xì)胞形成克隆及神經(jīng)元樣細(xì)胞增殖,且匯合度85~95%時(shí)即可傳代。
2)培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞,棄舊培養(yǎng)液,0.05%胰酶洗滌5秒后吸盡,再加入適量0.05%胰酶,37℃孵育,2~5 min后拿出輕拍培養(yǎng)瓶/板側(cè)面,顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況。
3)細(xì)胞消化至細(xì)胞變圓并開始脫落時(shí)用原代細(xì)胞終止培養(yǎng)基終止消化,并將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中,1500 rpm,3 min。
4)棄上清,以1~5mL條件培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,活細(xì)胞計(jì)數(shù),將細(xì)胞懸液按適合的細(xì)胞密度接種于培養(yǎng)瓶/板,加入y射線輻照后的NIH-3T3細(xì)胞(不同規(guī)格培養(yǎng)瓶/板底面積、接種原代細(xì)胞數(shù)量、添加滋養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量如表1、表2 所示),補(bǔ)加條件培養(yǎng)基至所需體積,十字交叉混勻,培養(yǎng)容器75%表面消毒后置37℃5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。其他步驟同上。
注意事項(xiàng):
1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
2.本產(chǎn)品中含有胎牛血清和原代細(xì)胞專用抗生素,如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗,可直接使用。
3.樣本需為腫瘤組織,且腫瘤細(xì)胞比例越高(>50%),培養(yǎng)成功率越高。
4.為保持本產(chǎn)品的理想使用效果,不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。
5.請(qǐng)于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品,超出保質(zhì)期,必須放棄使用。
6.原代細(xì)胞初次接種時(shí)會(huì)貼壁較慢和貼壁不牢,若無必要,盡量減少取出觀察的次數(shù),建議2~3天一次。
7.傳代消化時(shí)切記不要消化過度,不宜超過5min,對(duì)細(xì)胞造成損傷,影響細(xì)胞狀態(tài)。
8.接種細(xì)胞時(shí)注意細(xì)胞密度,不可過稀或過密。
9.使用產(chǎn)品時(shí)應(yīng)注意無菌操作,避免污染。
10.本產(chǎn)品僅用于科研用途,不能用于體外診斷。


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